2020 年 5 月 13 日，Oliver Hardick 在网络研讨会上提出了“克服新兴下游瓶颈的快速循环蛋白 A 基纤维层析法”。在本文中，我们重点介绍并回答网络研讨会期间提出的最常见问题。
Fibro 层析法中的产品/工艺相关杂质的特征是否与蛋白 A 填料的特征类似？
是的，MabSelect PrismA 填料和 Fibro PrismA 之间的纯化数据非常相似，它们都含有蛋白A配基。我们已经通过分析 HCP 减少、DNA 去除、蛋白 A 泄漏和聚集体形成，在 50 多种工业 mAb 中证明了这一点。我们还分析了不同批次的HCP减少量，结果显示出很强的一致性。这证明了配基在亲和层析中的重要性。
是否有计划在 96 孔滤板装置中使用 Fibro 以进行筛选？
目前没有。HiTrap Fibro PrismA 与 ÄKTA pure或 ÄKTA avant，以及自动进样器配合使用，可在超快速纯化循环中出色完成 HTPD 工作，并且无需自动化处理系统。此外，Fibro 可得到完整的层析图谱，这提供了深刻的工艺理解与思路。
是否有原位清洁建议？具体是什么？我想知道 CIP 步骤是否会大幅增加循环时间？
虽然我们建议每个循环都使用0.5或1 M NaOH进行30或60s的短CIP步骤，但我们见过有的工艺在没有 CIP 步骤的情况下达到了 200 个循环。这可以在 5 至 8 分钟的循环时间内实现。反转 CIP 步骤的流向并重新平衡也会提高清洁步骤的效率。
低滴度 (< 0.1 g/L) 如何影响结合载量？是否可以将大量样品加载到 Fibro 单元上而不会被洗掉？
不会有任何影响。展示的动态结合载量通常是相同的，我们已经用低至 0.01 g/L 的样品证明了这一点。低滴度与高流速相结合，可以使 Fibro 层析法成为低滴度样品的理想选择。但样品的滴度会对单元上加载的样品量产生影响。样品滴度较低意味着每个循环的样品量较大，我们建议在每个循环中使用更严格的 CIP 方案，采用反向流、低 pH 值范围，以及与 1.0 M NaOH 接触更长时间。
有关可从产品演示文稿中分享的有关低滴度/高容量应用示例的更多信息，请与您当地的销售代表联系。您还可以在网页上找到使用说明。
Fibro 层析技术是否会产生很大的洗脱体积？
与基于填料的蛋白 A 捕获的情况一样，洗脱液 mAb 浓度随 mAb 和工艺的不同而不同。我们的目标是使大规模 GMP 兼容 Fibro 单元实现 2 至 3 MV 的洗脱体积，并在大型 Fibro 单元上实现大于 10 g/L 的洗脱液 mAb 浓度。对于小规模 Fibro 单元，洗脱池体积会更大，HiScreen Fibro PrismA 为 3 至 4 MV，HiTrap Fibro PrismA 为 6 至 7 MV。
填料层析法通过层析柱效率测试（例如 HETP）来监测层析柱完整性。Fibro PrismA 是否有此类测试？
所有与 GMP 兼容的 Fibro 单元在以经过消毒的形式发货之前，都经过完整性和功效测试，可以立即使用。用户也可以通过突破性测试（代理给 HETP）来完成此操作，相关详细信息将随购买的单元一起提供。
缓冲液消耗量是否会大于基于填料的工艺？
层析步骤中的缓冲液消耗量高度取决于结合载量，因此它取决于您与哪种填料进行比较。从每个循环的柱体积/基质体积的角度来看，我们希望 Fibro 层析法能够达到同样甚至更好的效果。最新推出的高载量填料（例如 MabSelect PrismA）具有更高的结合能力，因此缓冲液的消耗量也略有降低。Fibro 中的缓冲液用量不会与现有的缓冲液生产基础设施不符。我们的目标是使缓冲液消耗量保持在 0.5 至 0.6 L/g 左右，这已在我们的合作中实现。
您是否有关于 Fibro PrismA 单元病毒清除率的任何数据？
病毒清除率数据与使用 MabSelect PrismA 获得的数据非常相似。我们会在接近发布与 GMP 兼容的更大 Fibro PrismA 单元时公布结果。这是配基在该步骤中的重要性的另一个证明。在此产品捕获操作中，对产品流影响最大的是 PrismA 配基。
您如何看待以每天 200 个循环的 Fibro 工艺规模执行的低 pH 值病毒灭活处理？
Fibro 后的低 pH 值病毒灭活工艺可以根据用户的喜好以多种方式进行处理。许多用户会将 200 次洗脱液馏分作为一个批次收集在一个罐中，因为工艺持续时间与当前填料柱操作一致。其他用户会将其分成更小的子批次，每个子批次合并 50 种馏分，在 VI 之后汇聚在一起或继续作为单独的子批次进行处理。一些实现连续装置的用户正在探索连续的低 pH 值 VI 操作。
您能解释一下在生产规模的工艺中是如何使用 Fibro 的吗？相比于基于填料的层析法有哪些优势？
Fibro 在生产规模的核心优势是其灵活性。与基于填料的层析法相比，在更大规模下，您可以利用Fibro快速纯化循环来缩短蛋白A捕获时间。这样可以为其他操作节省时间。或者，您也可以在一个上游批次中用尽单元的整个使用寿命（约 200 个循环），从而减少耗材的数量和成本。与基于填料的层析法相比，这可以实现经济高效的单批层析，从而显著降低临床生产成本。在商业生产中，一次性操作可减少工艺之间的冗长转换，而且不再需要进行清洁验证，因此成为多产品生产青睐的规格。
样本预处理能影响 Fibro 单元的使用寿命吗？
循环的寿命与加载到 Fibro 单元上的 mAb 收获物的属性和体积直接相关。使用滴度为 2-5g/L 的澄清样品观察了大于200个循环的多个寿命实验案例。通常，可以在 Fibro 单元上使用与填料相同的样本制备程序。我们建议通过离心和过滤来澄清 mAb 收获液。在处理较难处理或低滴度的样品时，可以使用深层过滤有效去除工艺相关杂质。我们已经知道，对于某些较难处理的样品，增加一个步骤以去除带电颗粒，包括 DNA/HCP 或染色质（例如带电深层过滤器、硅藻土助滤剂或选择性沉淀），将会显著延长 Fibro 单元的使用寿命
使用 Fibro PrismA 是否对硬件有任何特定要求？
第一代 Fibro PrismA 的开发重点考虑了与现有硬件的兼容性。Fibro PrismA 使用与填料层析法相同的缓冲液成分和体积、层析系统、基础设施和配基，确保与现有生物制造设施相匹配。即将推出的大规模 Fibro PrismA 单元设计用于配合 ÄKTA 的一次性流路系统使用。
Fibro 单元可以在 PCC 模式下使用吗？
在大多数情况下，以这种方式操作 Fibro 没有任何优势。Fibro 具有传统单层析柱装置的所有生产率优势。利用其快速纯化循环功能，您可以在一个批次中用尽整个寿命（约 200 个循环），最大程度地减少分离单元的占用空间。生产率按每小时每升吸附剂纯化的 mAb 克数 (g/L/h) 衡量。在多层析柱装置中，克数和升数同时倍增，因此影响极小。
请注意，对于滴度极低 (< 0.5 g/L) 的料液，Fibro 方法仍然比多柱填料层析法更具优势，因为该方法的上样时间较长，可以在样本加载过程中完成其余的循环。
Cytiva 计划如何扩展其基于纤维的产品？
2021 年，Fibro PrismA 产品组合将会扩展，以支持临床和商业规模的 mAb 生产。Fibro 技术平台适用于除 mAb 捕获以外的广泛应用。可用于填料的所有配基也可以附加到 Fibro 单元上。Fibro 在结合/洗脱操作中的优势显而易见，但也展示了在用梯度洗脱法分离性质相近的组分的潜力。将来可能会出现各种各样的选择。
基质的大孔隙度使 Fibro 技术具有强大的潜力，可用于纯化用于疫苗以及细胞和基因疗法的病毒载体，例如 AAV 和慢病毒。Fibro 平台计划包括用于其他大型实体的产品，例如囊泡、质粒和 mRNA。
如果您面临特定的商业工艺挑战，需要使用优势比 Fibro 更明显的其他配基，请与您当地的 Cytiva 代表联系，进一步讨论这一问题。