根据所有优质层析文档,层析图谱中的峰应该是对称的,但实验室的真实情况如何?产生“前倾峰”或“拖尾峰”的原因多种多样,但大部分都可轻易解决。

例如,前倾峰通常是由层析柱过载或过度填充引起的。同样,拖尾峰可能是由于填充不足或样本太粘稠造成的。

另一个问题是未检测到峰,这可能是由于谱带过度展宽造成的。

Cytiva R&D 蛋白纯化专家总结了不对称峰的其他常见原因及解决方案,见下表。

可能原因

补救措施

层析柱过载

  • 减少上样量并重复操作

层析柱”过度填充”

层析柱中存在窜流

层析柱被污染

  • 使用推荐的程序清洁
可能原因

补救措施

层析柱”填充不足”

起始缓冲液条件不正确,因此样本未与层析柱结合

  • 调节 pH 值。检查起始缓冲液中的盐浓度

样本太粘稠

  • 在起始缓冲液中稀释样本

层析柱被污染

  • 使用推荐的程序清洁

系统体积大导致谱带展宽

  • 检查模块、管路和连接是否存在不必要的大体积
可能原因

补救措施

样本在选择的波长范围内吸收很差

  • 使用不同的波长(例如,214 nm 而非 280 nm)

谱带过度展宽

缓冲液中有杂质,因此紫外基线随梯度上升

  • 采用优质的试剂

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