作者：Klaus Hochleitner。
许多医护人员使用全血测试来快速简单地检查生物标志物的存在。常见的例子包括，在没有实验室的地方进行传染病分子测试，以及在家里或救护车上使用便携式心脏标志物检测试剂盒。
检测细胞外标志物时，红细胞和白细胞都会干扰侧流测试。红细胞颜色鲜艳，在氧化还原反应中很活跃，会影响结果和读数。白细胞含有 DNA，这也会影响快速测定的灵敏度。
有效分离血浆和血细胞，可以提高诊断测试的灵敏度和可靠性，这是开发可靠测定方法的关键。然而，有几个常见的问题可能会妨碍有效的全血分离。下文介绍这些挑战和相应的潜在补救措施。
全血分离挑战 1：什么是溶血？
当红细胞破裂并将其内容物（最重要的是血红蛋白）释放到血浆中时，即发生溶血。当这种情况发生时，血浆会变成红色，使可靠地判断读数更加困难。
溶血的一个常见原因是使用了旧样本或处理时对细胞造成了压力。在样品垫（又称全血分离膜）上添加新鲜血液并且尽量减少处理步骤时，可以降低溶血的风险。
使用不合适的玻璃纤维型样品垫也会导致溶血。直径小的玻璃纤维可以对细胞膜施加高应力，有效地切开红细胞。如果您认为纤维直径可能导致溶血，请尝试使用直径较大的纤维滤器，以减少应力和损坏细胞膜的风险。
过滤过程中使用的洗涤缓冲液的类型也会影响溶血的风险。洗涤缓冲液含有表面活性剂和盐，前者有可能破坏细胞膜，后者在浓度不理想的情况下会导致细胞膨胀或收缩。含温和表面活性剂的等渗缓冲液可以最大限度地减少洗涤缓冲液损坏细胞的风险。
全血分离挑战 2：红细胞穿透
与溶血相似但不同的一种效应是红细胞穿透；两者都会导致血浆在分离后保持红色。细胞穿透的常见原因包括分离器边缘泄漏和使用的血量超过分离器容量。
如果初步测试显示有细胞穿透，在某些情况下，只需减少样品量或增大全血分离垫的容积即可。沿着分离垫的边缘施加足够的压力并确保细胞不能在边缘泄漏，这也将最大限度地减少穿透。
全血分离挑战 3：分析物结合
过滤器的玻璃纤维有时可以在其表面结合分析物。玻璃的疏水性使一些蛋白和核酸通过疏水作用粘附在纤维上。
避免粘附纤维的一个方法是在纤维上涂覆一层聚合物以使基质更亲水。聚乙烯醇 (PVA) 是一种常见的亲水涂层，带有 PVA 涂层的过滤材料，如 Fusion 5，具有高度亲水的表面，与大多数分析物都不相互作用。
全血分离挑战 4：全血分离不均匀
过滤基质内的不均匀性会导致样品分离不均匀。液体在分离垫的某些部位流动得比在其他部位快，会导致测试运行时间不同，造成结果不一致。
这种不均匀的流动可能是由于试验的设计和构建或测定方案中的细微差别造成的。确保选择高度均匀的过滤材料，并对样品应用的方法和位置提供明确的指导，可以帮助实现一致的全血分离。
如何选择合适的过滤器类型
有一系列适合全血分离的过滤材料。滤器类型对应用场景的适用程度往往取决于预期样品所需的容量，因此也取决于厚度。
不同容积的深层过滤器包括：
- LF1，适用于 10 µL 至 15 µL 体积
- MF1 和 Fusion 5，适用于 15 µL 至 50 µL 体积
- VF2 和 GF/DVA，适用于 50 µL 以上体积
不确定该使用哪种过滤材料？
我们的专家团队接受过过滤故障排除方面的培训，可以为您的测定推荐合适的材料。他们可以帮助识别诊断测定开发中可能遇到的问题的原因和解决方案。请联系您当地的 Cytiva 代表，讨论您的需求。